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淋巴細(xì)胞分離液-人

更新時(shí)間:2010-12-24      996
SC1077   100 ml   200 元

概述:聚蔗糖商品名為Ficoll 400,泛影葡胺是臨床使用的造影劑。二者組成的淋巴細(xì)胞分離液(Lymphocyte Separation Medium)具有低粘度、低滲透壓、無(wú)毒等特點(diǎn),因而在過(guò)去幾十年里一直是分離血液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞和單核粒細(xì)胞)的標(biāo)準(zhǔn)操作方法。分離時(shí)將淋巴細(xì)胞分離液置試管底層,上面鋪加抗凝全血,兩者形成一個(gè)清晰的界面。室溫水平低速離心后出現(xiàn)幾個(gè)不同層次的液體和細(xì)胞帶。紅細(xì)胞和多核粒細(xì)胞密度大于分層液而沉積于管底。血小板和單個(gè)核細(xì)胞與分層液密度相當(dāng),在血漿層和分離液的界面形成白膜狀條帶,吸取該層細(xì)胞洗滌去除血小板得到純凈的單個(gè)核細(xì)胞。其中單核粒細(xì)胞純度~95%,淋巴細(xì)胞純度90~95%,得率約80%以上其高低與室溫有關(guān),分離溫度低于10oC或超過(guò)25oC會(huì)降低細(xì)胞得率。

人與不同動(dòng)物血中單個(gè)核細(xì)胞對(duì)
細(xì)胞分離液的密度要求各不相同。我們提供兩種密度的淋巴細(xì)胞分離液:淋巴細(xì)胞分離液Lymphocyte Separation Medium (Human),用于分離人血液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞/淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞分離液Lymphocyte Separation Medium (Animal),用于分離小鼠、大鼠、豚鼠、兔、雞、貓、牛的血液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞/細(xì)胞分離液。

產(chǎn)品信息:
100 ml
細(xì)胞分離液-人 Lymphocyte Separation Medium (Human),目錄號(hào)SC1077,用于分離人血;
100 ml 淋巴細(xì)胞分離液-動(dòng)物 Lymphocyte Separation Medium (Animal),目錄號(hào)SC1083,用于分離動(dòng)物血;
均含F(xiàn)icoll-400和泛影葡胺,pH8.0。高溫除菌。避光2-8 oC穩(wěn)定2年。

操作方法:
1. 取新鮮血液,用肝素或枸櫞酸鈉或EDTA抗凝?;蛘?,取血后靜置自然沉降1h,取上層血漿及交界面的細(xì)胞。
2. 用等體積PBS或0.9% NaCl稀釋血液或血漿。1:1稀釋血液可降低紅細(xì)胞的凝聚,提高淋巴細(xì)胞收獲量。
3. 取3 ml淋巴細(xì)胞分離液加入離心管管底,并升溫到室溫。
4. 用巴斯德玻璃吸管吸取6 ml稀釋后的血液樣品,或者取3 ml未抗凝全血或未稀釋血漿,延管壁緩慢鋪到淋巴細(xì)胞分離液上面,勿打亂液層界面。
5. 水平轉(zhuǎn)子離心2000 rpm/min或700g離心20 min,室溫約20 oC。存放2h以上的血液應(yīng)離心30 min。
6. 離心后管底是紅細(xì)胞,中間層是分離液,zui上層是血漿。血漿層與分離液之間是一薄層較致密的白膜,含單個(gè)核細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞和單核粒細(xì)胞)。推薦用吸管直接插入到單個(gè)核細(xì)胞層并吸取該層,放入另一試管中。
7. 加10 ml生理鹽水稀釋分離的淋巴細(xì)胞,250g離心10 min,棄上清。重復(fù)洗滌1-2次,除去血小板和抗凝物質(zhì)。zui后用PBS或合適的培養(yǎng)基將淋巴細(xì)胞稀釋備用。

注意事項(xiàng):
1. 為保持淋巴細(xì)胞的活性,應(yīng)該采血后馬上進(jìn)行分離。分離的細(xì)胞層實(shí)際上是單個(gè)核細(xì)胞層,包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。
2. 小動(dòng)物如小鼠大鼠可斷頭取血,抗凝,用PBS 1:1稀釋血液增加回收率。分離時(shí)按照比例,每一份淋巴細(xì)胞分離液加兩份稀釋后的血液。如果操作無(wú)誤但離心后的界面之間不能形成單個(gè)核細(xì)胞層,可能是血液量不足,或未使用新鮮血液,或者不適于分離該種動(dòng)物血液。 相關(guān)信息:
透析袋,細(xì)胞分離液,抗體,細(xì)胞因子,fermentas,
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