羅丹明123染色線粒體膜
羅丹明123染色檢測線粒體膜電位
外觀：紅棕色粉末
化學(xué)名：Rh123 羅丹明123
別名： Rhodamine 123; Rh123
分子式：C21H17CLN2O3
分子量：380.82
配制：羅丹明123粉劑用甲醇配成1mg/mlde 儲備液，染色時用DPBS緩沖液將其稀釋為所需濃度
保存：冰箱-20度避光
一、檢測原理：
羅丹明123（Rhodamine 123）是一種可透過細胞膜的陽離子熒光染料，是一種線粒體跨膜電位的指示劑。其在正常細胞中能夠依賴線粒體跨膜電位進入線粒體基質(zhì),熒光強度減弱或消失。而在凋亡發(fā)生時，線粒體膜完整性破壞，線粒體膜通透性轉(zhuǎn)運孔開放，引起線粒體跨膜電位（ΔΨm） 的崩潰, Rh123 重新釋放出線粒體, 從而發(fā)出強黃綠色熒光，可用熒光顯微鏡、熒光光度計或流式細胞儀檢測，通過熒光信號的強弱來檢測線粒體膜電位的變化和凋亡的發(fā)生，可用于培養(yǎng)的細胞或從組織中提取出的線粒體的膜電位檢測。
二、 使用方法：
1．細胞染色及分析
（1）培養(yǎng)細胞1×106/mL重懸于培養(yǎng)基中；
（2）加入羅丹明123染液0.1μg/mL～50 μg/mL （根椐細胞種類不同而濃度不同，一般3～10 μg/mL）；
（3）37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱孵育1～30 min（根椐細胞種類不同而不同，一般10 min）；
（4）離心以培養(yǎng)基洗細胞兩次；
2． 組織提取的線粒體染色及分析
（1）按常規(guī)方法提取的線粒體，用適量的1×Assays Buffer（將5×Assays Buffer 用水稀釋5倍）重懸；
（2）常規(guī)方法進行蛋白含量測定后，用1×Assays Buffer調(diào)配成3mg/mL的線粒體溶液；
（3）取2mL 1×Assays Buffer和1mL線粒體溶液；
（4）加入適量待測化合物（同時設(shè)空白對照組），250C保溫min；
（5）加入羅丹明123染液10 μL；
（6）熒光光度計檢測：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于250C下測定，激發(fā)波長488～505nm，發(fā)射波長530nm，連續(xù)記錄從0 min～30 min內(nèi)熒光強度的變化。
三、注意事項
1、操作時需戴手套
2、羅丹明123為通透性染料，可以自由進入細胞
3、孵育時，必須避免光照
4、使用時，避免污染母液
5、染色完成后，即刻進行熒光檢測分析
